TMEM55B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410227-LAC

TMEM55B codifica una fosfatasi transmembrana dei fosfoinositidi, implicata nella regolazione dei pool di fosfati del fosfatidilinositolo che controllano l’identità e il traffico di membrana. Modulando la segnalazione dei fosfoinositidi a livello endosomiale e lisosomiale, TMEM55B può influenzare la maturazione delle vescicole, lo smistamento del carico e le dinamiche di membrana legate all’autofagia. Un’alterata omeostasi dei fosfoinositidi è ampiamente associata alle risposte allo stress cellulare e a una segnalazione di crescita deregolata, rendendo TMEM55B rilevante per studi sulla funzione degli organelli in contesti associati a patologie. La sua espressione e attività sono quindi di interesse nelle indagini meccanicistiche sul rimodellamento delle membrane, sul sensing dei nutrienti e sul crosstalk tra vie di segnalazione che dipende da segnali lipidici specifici di compartimento.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM55B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TMEM55B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM55B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM55B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TMEM55B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TMEM55B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.