TMEM192 Plasmide Double Nickase (h): sc-415021-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TMEM192 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TMEM192 Double Nickase Plasmid (h) e il TMEM192 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TMEM192. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TMEM192 Antibody (F-12): sc-518207
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TMEM192 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TMEM192 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-415021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMEM192 codifica una proteina transmembrana multipasso, arricchita nelle membrane lisosomiali e implicata nel mantenimento dell’identità del lisosoma, nell’organizzazione della membrana e nell’omeostasi proteolitica. Influenzando il traffico e il turnover lisosomiale, TMEM192 si interseca con vie che controllano la maturazione endolisosomiale, la funzione autofagia–lisosoma e le risposte cellulari allo stress. Una dinamica lisosomiale deregolata è ampiamente rilevante per la neurodegenerazione, la biologia delle infezioni e il metabolismo delle cellule tumorali, rendendo TMEM192 un bersaglio utile per studiare come i processi dipendenti dal lisosoma plasmino la fisiologia cellulare. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di TMEM192 può aiutare a chiarire i legami tra la composizione della membrana lisosomiale e le reti di segnalazione catabolica a valle.
TMEM192 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TMEM192 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TMEM192. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TMEM192. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TMEM192 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.