TMEFF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404818-ACT

TMEFF1 umano (transmembrane protein with EGF-like and two follistatin-like domains 1) codifica una proteina di membrana a singolo passaggio implicata nelle interazioni con ligandi extracellulari e nella modulazione della segnalazione dei fattori di crescita. Le funzioni riportate collegano TMEFF1 alla regolazione dei programmi di proliferazione e differenziamento cellulare, con effetti dipendenti dal contesto su vie mediate da recettori tirosin-chinasici come la segnalazione EGFR/ERK e PI3K–AKT. L’espressione di TMEFF1 è spesso deregolata in molteplici tipi di tumore ed è stata associata ad alterazioni degli stati cellulari epiteliali, dell’invasività e della segnalazione del microambiente. Queste caratteristiche rendono TMEFF1 un bersaglio utile per studiare l’integrazione dei segnali alla membrana plasmatica e le conseguenze trascrizionali delle perturbazioni delle vie dei fattori di crescita.

TMEFF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMEFF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMEFF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMEFF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMEFF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMEFF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMEFF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMEFF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMEFF1 nelle cellule tumorali con espressione di TMEFF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.