TGIF2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416231-LAC

TGIF2 (TG-interacting factor 2) codifica un regolatore trascrizionale homeobox della classe TALE che agisce principalmente come corepressore trascrizionale e modulatore, dipendente dal contesto, della segnalazione SMAD-dipendente. Interagendo con i componenti della via TGF-β/Activina e reclutando complessi di modifica della cromatina, TGIF2 contribuisce a modellare programmi trascrizionali che controllano le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione e la proliferazione. L’attività di TGIF2 è inoltre collegata alla regolazione del patterning dello sviluppo e delle transizioni epitelio–mesenchimali attraverso reti di regolazione genica che integrano segnalazione e stato della cromatina. Un’espressione deregolata di TGIF2 o un’alterazione dell’equilibrio delle vie di segnalazione è stata associata a fenotipi di sviluppo aberranti ed è stata studiata in modelli di riprogrammazione trascrizionale oncogenica e di progressione tumorale.

Le particelle di attivazione lentivirale TGIF2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TGIF2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TGIF2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TGIF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TGIF2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TGIF2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.