TAL2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423262-ACT

Il gene Tal2 del topo codifica il fattore di trascrizione TAL2 della famiglia basic helix-loop-helix (bHLH), un regolatore che si lega al DNA e che, attraverso reti trascrizionali, influenza la specificazione di linea e i programmi di differenziamento. L’attività di TAL2 si intreccia con i circuiti regolatori fondamentali dello sviluppo, in cui i fattori bHLH coordinano l’accessibilità della cromatina e le transizioni di stato cellulare. In contesti ematopoietici e neurali, un’espressione deregolata di TAL2 è stata associata a un controllo trascrizionale aberrante e a firme di espressione genica oncogeniche, sostenendone l’impiego come punto di ingresso meccanicistico per lo studio di vie associate alla trasformazione. In quanto fattore di trascrizione nucleare, TAL2 rappresenta un modello sperimentalmente gestibile per analizzare i regolatori a monte, i bersagli a valle e la rimodulazione dipendente dal contesto delle reti geniche.

TAL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tal2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TAL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tal2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tal2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tal2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAL2 nelle cellule tumorali con espressione di Tal2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.