Syntaxin 11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404809-ACT

STX11 codifica per sintaxina 11, una proteina t-SNARE che regola l’attracco delle vescicole e gli eventi di fusione di membrana, fondamentali per l’esocitosi regolata e per il traffico endosomiale. Nelle cellule immunitarie, la sintaxina 11 sostiene il rilascio dei granuli citotossici e contribuisce a una dinamica coordinata dei lisosomi secretori, che modella le risposte antivirali e antitumorali. L’alterazione della fusione di membrana dipendente da STX11 compromette la maturazione dei granuli e i percorsi di degranulazione, con una rilevanza documentata per fenotipi di immunodeficienza primaria caratterizzati da difetti della citotossicità linfocitaria. In quanto componente delle reti di traffico mediate da SNARE, la sintaxina 11 è inoltre utilizzata per studiare l’identità degli organelli, l’ancoraggio delle vescicole e la consegna del carico in contesti ematopoietici e infiammatori.

Syntaxin 11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STX11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Syntaxin 11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STX11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STX11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Syntaxin 11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STX11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Syntaxin 11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Syntaxin 11 nelle cellule tumorali con espressione di STX11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.