Synip Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423213

Panoramica

Stxbp4 codifica la synaptotagmin-binding protein 4 (Synip), una proteina interagente con la sintaxina che partecipa al traffico vescicolare regolato e alla fusione di membrana. Synip è stata collegata alla traslocazione delle vescicole contenenti GLUT4 stimolata dall’insulina, favorendo l’assorbimento di glucosio coordinando eventi di docking e fusione dipendenti da SNARE a livello della membrana plasmatica. Attraverso le sue interazioni con i componenti centrali del macchinario esocitotico, Synip contribuisce alla secrezione accoppiata allo stimolo e alla dinamica delle membrane endocellulari che si intersecano con le vie di segnalazione metabolica. Un’alterazione della funzione di Synip è stata associata a una ridotta sensibilità all’insulina e a difetti più ampi nei processi di trasporto vescicolare rilevanti per la ricerca sulle malattie metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synip (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stxbp4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stxbp4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stxbp4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synip.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stxbp4 per lo studio della segnalazione di Synip, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stxbp4 critici per la funzione di Synip
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stxbp4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synip CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synip CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stxbp4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synip Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synip (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stxbp4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stxbp4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.