Synapsin IIa Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423234

Panoramica

Syn2 codifica la sinapsina IIa, una fosfoproteina presinaptica che si associa alle vescicole sinaptiche e all’actina per regolare l’aggregazione delle vescicole, il mantenimento del pool di riserva e il rilascio di neurotrasmettitori dipendente dall’attività. La sinapsina IIa è controllata dalla fosforilazione a valle di cascate di segnalazione neuronale che includono PKA, CaMKII e MAPK/ERK, collegando l’ingresso di calcio e le vie dei secondi messaggeri alla plasticità sinaptica. Nei modelli del sistema nervoso murino, l’alterazione della funzione delle sinapsine viene utilizzata per studiare cambiamenti nell’equilibrio eccitazione–inibizione, nella sincronizzazione di rete e nella maturazione sinaptica, rilevanti per fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici. La perturbazione di Syn2 offre un approccio gestibile per indagare i meccanismi presinaptici che influenzano la stabilità dei circuiti e la trasmissione sinaptica evocata da stimoli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synapsin IIa (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Syn2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Syn2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Syn2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synapsin IIa.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Syn2 per lo studio della segnalazione di Synapsin IIa, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Syn2 critici per la funzione di Synapsin IIa
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Syn2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Syn2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synapsin IIa Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synapsin IIa (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Syn2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Syn2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.