SULT1A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-417793-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SULT1A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SULT1A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SULT1A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SULT1A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SULT1A1: sc-517645
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SULT1A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SULT1A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane SULT1A1 kodiert eine zytosolische Sulfotransferase, die die Sulfatkonjugation phenolischer Xenobiotika, endogener Hormone und verschiedener kleiner Moleküle katalysiert und dadurch deren Löslichkeit, Bioverfügbarkeit und Clearance verändert. Dieses Enzym des Phase‑II‑Stoffwechsels ist an chemischer Entgiftung und Bioaktivierung beteiligt, indem es Sulfatester erzeugt, die je nach Substratkontext entweder die Ausscheidung erleichtern oder reaktive Zwischenprodukte bilden können. Die SULT1A1‑Aktivität ist mit umfassenderen Netzwerken der Xenobiotika‑Antwort und der Redox‑Homöostase verknüpft, unter anderem durch koordinierte Regulation von Konjugationswegen und Metabolitenhandhabung. Unterschiede in Expression oder Funktion von SULT1A1 wurden im Zusammenhang mit interindividuellen Unterschieden im Arznei‑ und Karzinogenstoffwechsel sowie der Anfälligkeit für chemisch induzierten zellulären Stress untersucht.
SULT1A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SULT1A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SULT1A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SULT1A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SULT1A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.