striatin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406215-ACT

Il gene umano **STRN** codifica la striatina, una proteina scaffold legante la calmodulina, arricchita nel complesso **STRIPAK** (striatin-interacting phosphatase and kinase). Attraverso l’assemblaggio multiproteico, la striatina contribuisce a coordinare eventi di defosforilazione dipendenti da **PP2A** che si interfaccianno con la segnalazione **Hippo**, con reti di chinasi correlate alla **MAPK** e con le dinamiche del citoscheletro e dell’adesione che influenzano polarità e migrazione cellulare. Le perturbazioni della segnalazione associate a **STRN** sono state studiate nel contesto di un’alterata fosforegolazione, di vie di controllo della crescita e di fusioni geniche oncogeniche che coinvolgono STRN e possono rimodulare l’attività delle chinasi. Queste caratteristiche rendono la striatina un nodo utile per analizzare il crosstalk tra vie guidato dalla fosforilazione e programmi trascrizionali dipendenti dal contesto in modelli cellulari umani.

striatin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STRN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

striatin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STRN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STRN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di striatin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STRN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da striatin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via striatin nelle cellule tumorali con espressione di STRN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.