Stim2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431161

Panoramica

Stim2 (stromal interaction molecule 2) è un sensore del Ca2+ nel reticolo endoplasmatico che collega l’esaurimento delle riserve di Ca2+ del RE all’ingresso di calcio operato dai depositi (SOCE) regolando l’attività dei canali Orai nelle giunzioni tra RE e membrana plasmatica. Nelle cellule murine, STIM2 contribuisce a mantenere i livelli basali di Ca2+ citosolico e modula l’ampiezza e la durata della segnalazione Ca2+-dipendente che influenza la trascrizione guidata da NFAT, la funzione sinaptica e i programmi di attivazione delle cellule immunitarie. Attraverso queste reti di segnalazione del calcio, Stim2 è associato a processi quali l’eccitabilità e la plasticità neuronale, le risposte citochiniche e l’adattamento allo stress cellulare. La deregolazione della SOCE e della segnalazione dipendente da STIM2 è stata implicata in meccanismi rilevanti per la patologia, come neuroinfiammazione, autoimmunità e alterazioni delle vie di sopravvivenza cellulare, rendendo Stim2 un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Stim2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stim2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stim2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stim2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Stim2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stim2 per lo studio della segnalazione di Stim2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stim2 critici per la funzione di Stim2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stim2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Stim2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Stim2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stim2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Stim2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Stim2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stim2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stim2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.