Stat2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-423175-KO-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Stat2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Stat2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Stat2 Antibody (B-3): sc-514193
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Stat2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2) | sc-423175-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il trasduttore di segnale e attivatore della trascrizione 2 (Stat2) è un fattore di trascrizione chiave nella segnalazione degli interferoni di tipo I e di tipo III nelle cellule murine; forma il complesso ISGF3 con STAT1 e IRF9 per indurre l’espressione dei geni stimolati dagli interferoni. In seguito al legame con IFNAR/IFNLR, JAK1 e TYK2 fosforilano STAT2 coordinando programmi di difesa antivirale, presentazione dell’antigene e un più ampio rimodellamento trascrizionale dell’immunità innata. L’attività di Stat2 modula il crosstalk con le vie infiammatorie associate a NF-κB e MAPK e influenza le decisioni sullo stato cellulare durante l’infezione e l’attivazione immunitaria. Una segnalazione dipendente da STAT2 deregolata è stata collegata a una suscettibilità alterata alle infezioni virali e a patologie immuno-mediate, rendendo Stat2 un bersaglio genetico ampiamente utilizzato negli studi meccanicistici delle risposte agli interferoni.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Stat2 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stat2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stat2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stat2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Stat2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stat2 per lo studio della segnalazione di Stat2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Stat2 critici per la funzione di Stat2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stat2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Stat2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Stat2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stat2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Stat2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Stat2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stat2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stat2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.