SRp55 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401621-ACT

SRSF6 codifica il fattore di splicing umano ricco in serina/arginina SRp55, una proteina legante l’RNA che accoppia la selezione dei siti di splicing con l’elaborazione co-trascrizionale dell’RNA e l’esportazione dell’mRNA. SRp55 partecipa all’assemblaggio dello spliceosoma e regola decisioni di splicing alternativo che definiscono programmi di espressione delle isoforme, controllando proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Attraverso la modulazione dell’inclusione degli esoni e dell’architettura esone–introne, SRSF6 influenza vie a valle tra cui la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e reti di trasduzione del segnale sensibili all’equilibrio tra isoforme trascrizionali. Un’espressione o un’attività deregolata di SRSF6 è stata collegata in letteratura a pattern di splicing anomali osservati in molteplici contesti patologici, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per lo studio di fenotipi guidati dallo splicing nelle cellule umane.

SRp55 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SRSF6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SRp55 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SRSF6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SRSF6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SRp55. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SRSF6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SRp55 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SRp55 nelle cellule tumorali con espressione di SRSF6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.