SR-2C Plasmide Double Nickase (h): sc-400886-NIC

HTR2C codifica il recettore umano della serotonina 2C (SR-2C), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, il turnover dei fosfati di inositolo, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e l’attività a valle delle vie PKC/MAPK. SR-2C modula l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica, con ruoli di rilievo nella regolazione dell’appetito, nei comportamenti legati all’umore e nel controllo neuroendocrino. Il recettore è inoltre influenzato dall’editing dell’RNA, che altera la risposta ai ligandi e il bias di segnalazione, aggiungendo un ulteriore livello di regolazione post-trascrizionale. La disregolazione della segnalazione di HTR2C e dei pattern di editing è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e metabolici, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici dei circuiti serotoninergici e della dinamica delle vie dei GPCR.

SR-2C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTR2C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTR2C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTR2C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTR2C interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.