SR-2B Plasmide Double Nickase (m): sc-420994-NIC

Il gene murino Htr2b codifica il recettore della serotonina SR-2B (5-HT2B), un recettore accoppiato a proteine G che si associa principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la produzione di inositol fosfati, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e l’attività a valle delle vie PKC/MAPK. SR-2B contribuisce alla regolazione serotoninergica del tono vascolare, allo sviluppo e al rimodellamento cardiaco e a processi del SNC, tra cui la segnalazione sinaptica e le risposte neuroinfiammatorie. Alterazioni dell’attività di Htr2b sono state implicate in vie rilevanti per la disfunzione cardiovascolare e il rimodellamento fibrotico, nonché in fenotipi neuropsichiatrici legati a uno squilibrio dei circuiti serotoninergici. Queste caratteristiche rendono Htr2b un bersaglio utile per analizzare, in modelli murini, la segnalazione dei secondi messaggeri guidata dai GPCR, le risposte trascrizionali e la regolazione serotoninergica specifica di tessuto.

SR-2B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Htr2b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Htr2b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Htr2b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Htr2b interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.