SR-2A Plasmide Double Nickase (h): sc-401532-NIC

HTR2A codifica il recettore della serotonina 2A (SR-2A), un recettore accoppiato a proteine G che si associa principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, aumentare la segnalazione intracellulare del Ca²⁺ e stimolare cascate di fosforilazione dipendenti da PKC. La segnalazione di SR-2A interagisce con le vie MAPK/ERK e modula programmi di espressione genica che influenzano l’eccitabilità neuronale, la plasticità sinaptica e l’attività dei circuiti corticali. Nei tessuti umani, l’espressione di HTR2A e la segnalazione del recettore sono spesso studiate nel contesto della neurotrasmissione e della regolazione delle reti neuromodulatorie. Un’alterata attività della via SR-2A e varianti regolatorie in HTR2A sono state associate nella letteratura di ricerca a fenotipi neuropsichiatrici e alla variabilità della risposta ai trattamenti, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della segnalazione serotoninergica.

SR-2A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTR2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTR2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTR2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTR2A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.