SR-2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401532

Panoramica

HTR2A codifica il recettore umano della 5-idrossitriptamina 2A (SR-2A), un recettore accoppiato a proteine G che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, il turnover dei fosfati dell’inositolo, la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e l’attivazione della protein chinasi C. SR-2A modula l’eccitabilità neuronale e la plasticità sinaptica e si integra con reti più ampie di neurotrasmettitori attraverso il cross-talk con MAPK/ERK e vie correlate di secondi messaggeri. Le variazioni di espressione e di segnalazione di HTR2A sono frequentemente studiate nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici, inclusi alterazioni del tono serotoninergico e della funzione dei circuiti corticali mediata dai recettori. In quanto recettore di membrana con dinamiche regolatorie complesse, SR-2A rappresenta un nodo maneggevole per analizzare la segnalazione specifica di via e i meccanismi di desensibilizzazione/internalizzazione del recettore in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SR-2A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HTR2A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HTR2A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HTR2A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SR-2A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HTR2A per lo studio della segnalazione di SR-2A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HTR2A critici per la funzione di SR-2A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HTR2A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SR-2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SR-2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HTR2A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SR-2A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SR-2A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HTR2A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HTR2A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.