SPEN Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406083

Panoramica

SPEN (nota anche come SHARP) codifica un grande coregolatore trascrizionale nucleare legante l’RNA, che mette in comunicazione partner di legame al DNA specifici di sequenza e lncRNA (RNA lunghi non codificanti) con complessi in grado di modificare la cromatina. Attraverso interazioni con SMRT/HDAC e repressori correlati, SPEN contribuisce a programmi di silenziamento trascrizionale, inclusa l’inattivazione del cromosoma X dipendente da XIST, e influenza l’espressione genica specifica di linea cellulare. SPEN modula inoltre gli output trascrizionali in risposta ai segnali, con collegamenti riportati alla regolazione associata a Notch e a un più ampio controllo epigenetico di vie di sviluppo e correlate al sistema immunitario. Una funzione o un’espressione disregolata di SPEN è stata implicata in stati di differenziamento alterati e nel rimaneggiamento trascrizionale osservato in molteplici contesti patologici, sostenendone l’utilità come nodo meccanicistico negli studi di regolazione genica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPEN (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPEN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPEN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPEN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPEN.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPEN per lo studio della segnalazione di SPEN, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPEN critici per la funzione di SPEN
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPEN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPEN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPEN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPEN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPEN Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPEN (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPEN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPEN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.