Sox9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400143-ACT

SOX9 codifica il fattore di trascrizione Sox9, una proteina legante il DNA del gruppo ad alta mobilità (HMG) che regola la specificazione di linea e i programmi di differenziamento, inclusi la condrogenesi e lo sviluppo di molteplici tessuti epiteliali. Sox9 integra segnali provenienti da vie quali TGF-β/BMP, WNT/β-catenina, Hedgehog e Notch per controllare l’attività degli enhancer e l’accessibilità della cromatina durante le decisioni di destino cellulare. Nella biologia umana, un’espressione disregolata di SOX9 è associata a disturbi dello sviluppo ed è spesso implicata in reti trascrizionali legate al cancro, in cui un’alterata attività di Sox9 può influenzare la proliferazione, stati di tipo staminale e la plasticità epitelio-mesenchimale. In quanto regolatore dipendente dal contesto, SOX9 è ampiamente studiato in modelli di sviluppo degli organi, nella differenziazione delle cellule staminali e nei meccanismi di controllo trascrizionale in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Sox9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox9 nelle cellule tumorali con espressione di SOX9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.