SOAT1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417623-LAC

SOAT1 (sterol O-acyltransferase 1; ACAT1) è un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che esterifica il colesterolo libero con acil-CoA di acidi grassi a lunga catena per generare esteri del colesterolo da immagazzinare nelle gocce lipidiche. Controllando l’equilibrio tra colesterolo non esterificato ed esteri del colesterolo di riserva, SOAT1 contribuisce a regolare la composizione di membrana, l’omeostasi degli steroli e la gestione dei lipidi associati alle lipoproteine. L’attività di SOAT1 si interseca con il traffico del colesterolo, la biologia delle cellule schiumose e programmi più ampi del metabolismo lipidico che influenzano lo stress ossidativo e la segnalazione infiammatoria. Un accumulo deregolato di esteri del colesterolo e un’espressione alterata di SOAT1 sono stati collegati alla biologia delle lesioni aterosclerotiche e sono stati studiati anche nel contesto del rimodellamento lipidico tumorale e degli squilibri del colesterolo associati a malattie neurodegenerative.

Le particelle di attivazione lentivirale SOAT1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SOAT1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SOAT1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SOAT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SOAT1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SOAT1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.