SOAT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417623-ACT

SOAT1 (sterol O-acyltransferase 1; ACAT1) è un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza l’esterificazione del colesterolo libero in esteri del colesterolo, supportando la biogenesi delle goccioline lipidiche e l’omeostasi del colesterolo cellulare. Tamponando l’eccesso di steroli, SOAT1 influenza la composizione di membrana, il metabolismo delle lipoproteine e le vie di segnalazione sensibili agli steroli, inclusi i programmi lipidici regolati da SREBP e le risposte infiammatorie nei macrofagi. Un’attività alterata di SOAT1 è stata collegata alla formazione di cellule schiumose, alla disregolazione lipidica in ambito neurodegenerativo e alla riprogrammazione metabolica osservata in molteplici contesti tumorali, dove l’accumulo di esteri del colesterolo può correlare con proliferazione e adattamento allo stress. Queste caratteristiche biologiche rendono SOAT1 un bersaglio utile per studiare il traffico degli steroli, l’immagazzinamento lipidico e i fenotipi guidati dal colesterolo in modelli cellulari umani rilevanti.

SOAT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOAT1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SOAT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOAT1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOAT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SOAT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOAT1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SOAT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SOAT1 nelle cellule tumorali con espressione di SOAT1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.