SNAP 23 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417781-ACT

SNAP23 codifica la proteina 23 associata ai sinaptosomi, una Qbc-SNARE che si appaia con le sintassine e con membri della famiglia VAMP per catalizzare eventi di fusione di membrana necessari per l’esocitosi regolata e costitutiva. SNAP23 supporta l’attracco e il traffico delle vescicole alla membrana plasmatica, influenzando la secrezione, il riciclo endocitico e la traslocazione di GLUT4 nelle cellule sensibili all’insulina. Attraverso il controllo della fusione di granuli e vescicole, contribuisce alla degranulazione delle cellule immunitarie e al rilascio di citochine, e la sua disregolazione è stata associata ad alterazioni della segnalazione infiammatoria e a fenotipi metabolici rilevanti per la ricerca su diabete e obesità. SNAP23 interagisce inoltre con vie che regolano la dinamica di membrana e la disponibilità dei recettori sulla superficie cellulare, collegando il traffico vescicolare all’output di segnalazione in diversi tipi cellulari umani.

SNAP 23 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNAP23 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SNAP 23 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNAP23 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNAP23, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SNAP 23. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNAP23 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SNAP 23 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SNAP 23 nelle cellule tumorali con espressione di SNAP23 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.