SMCR7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406975

Panoramica

MIEF2 codifica la proteina del fattore di allungamento mitocondriale 2 (SMCR7/MiD51), un adattatore della membrana mitocondriale esterna che regola la fissione mitocondriale reclutando e organizzando la GTPasi DRP1. Attraverso il controllo dell’architettura della rete mitocondriale, MIEF2 influenza l’efficienza della fosforilazione ossidativa, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e i percorsi di controllo qualità mitocondriale come la mitofagia, incidendo così sul metabolismo cellulare e sulle risposte allo stress. Un’attività alterata di MIEF2 è stata associata a una dinamica mitocondriale deregolata osservata nella neurodegenerazione, nella disfunzione cardiometabolica e nella riprogrammazione metabolica correlata al cancro. In quanto nodo di collegamento tra morfologia dell’organello e segnalazione bioenergetica, MIEF2 è spesso oggetto di studio in ricerche sulla suscettibilità all’apoptosi, sulla segnalazione immunitaria innata di origine mitocondriale e sull’adattamento all’ipossia o allo stress da carenza di nutrienti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SMCR7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MIEF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MIEF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MIEF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SMCR7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MIEF2 per lo studio della segnalazione di SMCR7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MIEF2 critici per la funzione di SMCR7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MIEF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SMCR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SMCR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MIEF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SMCR7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SMCR7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MIEF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MIEF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.