Sm D3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405302-ACT

SNRPD3 codifica la proteina umana Sm D3 del core, un componente conservato dell’anello Sm che si assembla su snRNA ricchi in U per formare snRNP dello spliceosoma. Sm D3 sostiene la biogenesi degli snRNP e la fedeltà dello splicing del pre-mRNA, processi strettamente accoppiati alla trascrizione, al controllo qualità dell’RNA e ai programmi del ciclo cellulare. L’alterazione delle proteine Sm può compromettere la scelta dei siti di splicing e l’equilibrio delle isoforme trascrizionali, contribuendo a un ampio stress dei processi di maturazione dell’RNA, frequentemente osservato in contesti proliferativi e di neurosviluppo. SNRPD3 rappresenta quindi un utile punto di partenza per studiare l’assemblaggio dello spliceosoma, il metabolismo degli snRNA e la regolazione dell’espressione genica dipendente dallo splicing.

Sm D3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNRPD3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sm D3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNRPD3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNRPD3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sm D3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNRPD3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sm D3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sm D3 nelle cellule tumorali con espressione di SNRPD3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.