Slp2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405977

Panoramica

SYTL2 codifica la proteina 2 simile alla sinaptotagmina (Slp2), un effettore di Rab che collega le vescicole secretorie alla membrana plasmatica tramite interazioni fosfolipidiche mediate dal dominio C2 e attività di legame a Rab. Slp2 contribuisce all’esocitosi regolata e agli eventi di docking/priming delle vescicole che influenzano il traffico di membrana, il turnover dei recettori e la secrezione compartimentalizzata in diversi tipi cellulari. Attraverso il suo ruolo nel traffico dipendente da Rab, SYTL2 può influenzare la dinamica della segnalazione, l’organizzazione del citoscheletro e i programmi di motilità cellulare. Un’espressione o una funzione alterata di regolatori del traffico vescicolare come SYTL2 è stata associata a secrezione deregolata e a fenotipi invasivi nel cancro e in altre malattie in cui le vie di trasporto di membrana vengono rimodellate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Slp2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SYTL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SYTL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SYTL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Slp2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SYTL2 per lo studio della segnalazione di Slp2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SYTL2 critici per la funzione di Slp2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SYTL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Slp2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Slp2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SYTL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Slp2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Slp2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SYTL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SYTL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.