SLP-76 Plasmide Double Nickase (h): sc-401421-NIC

LCP2 codifica SLP-76, una proteina adattatrice citosolica che coordina la trasduzione del segnale a valle degli immunorecettori nelle cellule ematopoietiche. In seguito all’attivazione del recettore delle cellule T e dei recettori Fc, SLP-76 assembla complessi multiproteici con LAT, GADS, VAV1, ITK e PLCγ1 per propagare cascate di fosforilazione che inducono flussi di calcio, attivazione delle MAPK, rimodellamento del citoscheletro e adesione mediata da integrine. Attraverso queste vie, SLP-76 regola l’attivazione e lo sviluppo dei linfociti e la formazione della sinapsi immunologica, rendendo LCP2 un nodo chiave per lo studio della topologia delle reti di segnalazione immunitaria. Una segnalazione dipendente da SLP-76 deregolata è stata implicata in fenotipi di disfunzione immunitaria e in risposte infiammatorie alterate, a supporto della sua rilevanza nella ricerca meccanicistica sull’immunopatologia.

SLP-76 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LCP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LCP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LCP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LCP2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.