Slit2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401586-LAC

SLIT2 codifica per Slit2, un segnale di guida secreto associato alla matrice extracellulare, che si lega ai recettori ROBO per regolare l’instradamento degli assoni, la migrazione neuronale e la motilità cellulare direzionale. Oltre al neurosviluppo, la segnalazione Slit2–ROBO influenza la dinamica del citoscheletro tramite le GTPasi della famiglia Rho e interseca vie che controllano adesione e chemiotassi, includendo in alcuni contesti la modulazione della migrazione guidata da CXCL12/CXCR4. Un’alterata espressione di SLIT2 e il suo silenziamento epigenetico sono stati riportati in molteplici tipi di tumore e sono spesso studiati per i possibili ruoli in invasione, angiogenesi e comportamento metastatico. SLIT2 è inoltre oggetto di studio in biologia vascolare e nei processi infiammatori, in cui i segnali di guida modellano il traffico delle cellule endoteliali e immunitarie.

Le particelle di attivazione lentivirale Slit2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLIT2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Slit2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLIT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Slit2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLIT2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.