SLC26A3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403891-ACT

SLC26A3 codifica uno scambiatore cloruro/bicarbonato (DRA) espresso prevalentemente nelle cellule epiteliali intestinali, dove sostiene l’assorbimento elettro-neutro di NaCl e regola il pH luminale tramite un trasporto coordinato di anioni. Accoppiando l’ingresso di Cl⁻ alla secrezione di HCO₃⁻, SLC26A3 contribuisce all’omeostasi ionica dell’epitelio e all’equilibrio dei fluidi, interagendo funzionalmente con reti di trasporto che includono CFTR e altri membri della famiglia SLC26. L’alterazione o la ridotta espressione di SLC26A3 è associata alla diarrea congenita da cloruri e a più ampie perturbazioni della gestione gastrointestinale degli elettroliti, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della fisiologia del trasporto epiteliale. Un’attività di SLC26A3 modificata si interseca inoltre con vie che controllano la funzione di barriera mucosale e le risposte infiammatorie attraverso cambiamenti del microambiente ionico.

SLC26A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC26A3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLC26A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC26A3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC26A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLC26A3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC26A3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLC26A3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLC26A3 nelle cellule tumorali con espressione di SLC26A3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.