SLC17A9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432833

Panoramica

Slc17a9 codifica SLC17A9, un trasportatore vescicolare di nucleotidi (VNUT) che carica ATP e altri nucleotidi nelle vescicole secretorie, consentendo una segnalazione purinergica regolata. Controllando il contenuto vescicolare di ATP, SLC17A9 influenza la comunicazione dipendente dall’esocitosi che coinvolge le vie recettoriali P2X/P2Y e le risposte a valle legate al Ca²⁺ e alle MAPK in contesti neurali e immunitari. Questa attività di trasporto supporta processi tra cui la neurotrasmissione, l’attivazione della microglia e il rilascio di mediatori infiammatori, rendendo Slc17a9 un nodo utile per studiare il crosstalk neuro-immune e l’infiammazione sterile. Un’alterata gestione vescicolare dell’ATP e del tono purinergico è stata implicata nella segnalazione del dolore, nella neuroinfiammazione e nelle risposte al danno tissutale, collocando Slc17a9 come un bersaglio meccanicisticamente rilevante per l’analisi delle vie in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC17A9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc17a9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc17a9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc17a9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC17A9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc17a9 per lo studio della segnalazione di SLC17A9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc17a9 critici per la funzione di SLC17A9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc17a9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC17A9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SLC17A9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc17a9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC17A9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SLC17A9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc17a9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc17a9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.