Skip Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403370-ACT

SNW1 codifica Skip, um co-regulador nuclear conservado que acopla o splicing do pré-mRNA ao controle transcricional. Skip participa de complexos associados ao espliceossomo e coordena decisões de splicing alternativo que influenciam a progressão do ciclo celular, programas de diferenciação e a expressão gênica responsiva ao estresse. Por meio de interações com fatores de transcrição e complexos associados à cromatina, Skip ajuda a moldar os resultados do processamento de RNA, podendo remodelar redes de sinalização como a via Notch e a transcrição dependente de TGF-β/SMAD. A desregulação do splicing e da regulação transcricional ligados a SNW1 tem sido associada a estados proliferativos alterados e fenótipos oncogênicos, sustentando seu uso como ponto de partida mecanístico para estudar o processamento de RNA relevante para doenças.

Skip O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNW1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Skip O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNW1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNW1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Skip. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNW1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Skip no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Skip em células tumorais com expressão de SNW1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.