Six2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422957-LAC

Six2 (sine oculis homeobox homolog 2) è un fattore di trascrizione homeobox che regola il mantenimento delle cellule progenitrici e le scelte di destino di linea durante l’organogenesi nel topo, con ruoli di rilievo nell’autorinnovamento dei progenitori del nefrone e nella definizione dei pattern craniofacciali e scheletrici. Agisce all’interno di reti trascrizionali dello sviluppo e integra input di segnalazione, inclusi i programmi associati a WNT/β-catenina, FGF, BMP e Notch, per controllare proliferazione e tempi della differenziazione. Un’attività di SIX2 deregolata è collegata a traiettorie di sviluppo aberranti ed è stata associata ad alterazioni degli stati epitelio-mesenchimali e dei programmi proliferativi rilevanti per anomalie congenite e biologia tumorale. Nei sistemi sperimentali, Six2 rappresenta un nodo chiave per analizzare i circuiti di regolazione genica che governano staminalità, morfogenesi e specificazione tissutale.

Le particelle di attivazione lentivirale Six2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Six2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Six2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Six2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Six2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Six2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.