Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SIRT3 Plasmide Double Nickase (m): sc-425704-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIRT3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SIRT3 Double Nickase Plasmid (m) e il SIRT3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sirt3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SIRT3 Antibody (F-10): sc-365175
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIRT3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425704-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-425704-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene **Sirt3** nel topo codifica la deacetilasi mitocondriale **SIRT3** NAD⁺-dipendente, un regolatore centrale dell’acetilazione delle proteine mitocondriali e del metabolismo ossidativo. SIRT3 modula vie che includono la β-ossidazione degli acidi grassi, il ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA), l’attività della catena di trasporto degli elettroni e la detossificazione delle specie reattive dell’ossigeno, attraverso la deacetilazione di enzimi mitocondriali chiave. Plasmando la respirazione mitocondriale, l’equilibrio redox e le risposte cellulari allo stress, SIRT3 influenza l’adattamento metabolico nei tessuti ad alta richiesta energetica. Un’alterata attività di SIRT3 è stata associata, in ricerche precliniche, a fenotipi di disfunzione mitocondriale rilevanti per lo stress metabolico, modelli di neurodegenerazione e danni legati all’infiammazione.
SIRT3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sirt3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sirt3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sirt3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sirt3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.