Plasmide CRISPR d'Activation (h) Set1B: sc-406129-ACT

Le gène humain **SETD1B** code **Set1B**, une histone méthyltransférase contenant un domaine SET qui catalyse la méthylation de **H3K4**, associée à une chromatine transcriptionnellement active. En tant que composant de complexes de type **COMPASS**, Set1B contribue à coordonner les états de chromatine à proximité des promoteurs, l’initiation de la transcription et la communication entre enhancers et promoteurs, en s’intégrant à une régulation épigénétique plus large et à des programmes d’expression génique dépendants de l’ARN polymérase II. Une perturbation de la fonction de **SETD1B** est associée à une dérégulation du contrôle transcriptionnel et à des réseaux de gènes du développement altérés, avec une pertinence pour des phénotypes neurodéveloppementaux et d’autres contextes où la régulation génique dépendante de la chromatine est perturbée. Ces caractéristiques font de **SETD1B** un locus utile pour étudier comment la méthylation de H3K4 façonne la spécification des lignages, la fonction neuronale et la transcription répondant aux stimuli.

Set1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SETD1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Set1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SETD1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SETD1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Set1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SETD1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Set1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Set1B dans les cellules tumorales présentant une expression de SETD1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.