Selenoprotein I Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408993-ACT

Il gene umano **SELENOI** codifica la **selenoproteina I**, un enzima localizzato nel reticolo endoplasmatico (RE) che funge da **fosfotransferasi dell’etanolamina**, catalizzando una tappa chiave della biosintesi *de novo* della **fosfatidiletanolammina**. Controllando la composizione dei fosfolipidi di membrana, SELENOI influenza l’omeostasi del RE, il traffico vescicolare e i processi di segnalazione dipendenti dai lipidi che modellano le risposte cellulari allo stress e la funzione degli organelli. Alterazioni del metabolismo dei fosfolipidi dell’etanolamina sono state associate a una dinamica di membrana modificata e alla comunicazione mitocondrio-RE, processi rilevanti per la neurobiologia e la regolazione metabolica. In quanto selenoproteina, SELENOI si interseca inoltre con vie sensibili allo stato redox attraverso la biologia del selenio e il controllo di qualità delle proteine associato al RE.

Selenoprotein I Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELENOI senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Selenoprotein I Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELENOI nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELENOI, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Selenoprotein I. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELENOI nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Selenoprotein I nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Selenoprotein I nelle cellule tumorali con espressione di SELENOI silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.