Sec61α1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424716

Panoramica

Sec61a1 codifica Sec61α1, la subunità centrale che forma il poro del traslocone Sec61 nella membrana del reticolo endoplasmatico (RE), che media l’importazione co-traduzionale e post-traduzionale di proteine secretorie e di membrana. Accoppiando l’ancoraggio del ribosoma con la traslocazione e l’integrazione del peptide, Sec61α1 supporta la biogenesi proteica, il controllo qualità del RE e le vie di proteostasi, inclusi i segnali della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e la degradazione associata al RE (ERAD). Alterazioni della funzione del canale SEC61 sono state collegate a difetti dell’omeostasi della via secretoria e delle risposte cellulari allo stress, processi spesso implicati in modelli di infiammazione, disfunzione metabolica e neurodegenerazione. Nei sistemi murini, Sec61a1 rappresenta un punto d’ingresso sperimentalmente gestibile per studiare come la capacità di importazione nel RE influenzi segnalazione, differenziamento e sopravvivenza in condizioni di stress proteotossico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec61α1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sec61a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sec61a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sec61a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sec61α1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sec61a1 per lo studio della segnalazione di Sec61α1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sec61a1 critici per la funzione di Sec61α1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sec61a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sec61α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sec61α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sec61a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sec61α1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sec61α1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sec61a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sec61a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.