SCYL1 Plasmide Double Nickase (m): sc-429734-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SCYL1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SCYL1 Double Nickase Plasmid (m) e il SCYL1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Scyl1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SCYL1 Antibody (KA.72): sc-130466
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SCYL1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429734-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Scyl1 codifica SCYL1, una proteina di tipo pseudochinasico evolutivamente conservata che funge da piattaforma (scaffold) nel traffico di membrana e nella proteostasi. SCYL1 si localizza all’interfaccia Golgi/reticolo endoplasmatico (RE) e si associa al trasporto retrogrado mediato da COPI e alla dinamica vescicolare dipendente da ARF, sostenendo il corretto recupero del carico e l’omeostasi degli organelli. Attraverso collegamenti con il metabolismo dell’RNA, il controllo qualità delle proteine e la segnalazione adattativa allo stress, SCYL1 contribuisce alla resilienza cellulare neuronale ed epatica in condizioni fisiologiche di richiesta elevata. L’alterazione della funzione di SCYL1 è stata associata a neurodegenerazione e patologia epatica in sistemi modello, rendendola rilevante per studi sui difetti del trasporto intracellulare e sui meccanismi di malattia legati allo stress.
SCYL1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Scyl1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Scyl1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Scyl1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Scyl1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.