Scleraxis Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422833-LAC

Il gene Scx del topo codifica la scleraxis, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix che funge da determinante di linea cellulare per i fibroblasti di tendini e legamenti e regola programmi genici della matrice extracellulare, inclusi collagene fibrillari e proteoglicani. La scleraxis integra la meccanotrasduzione e la segnalazione TGF-β/BMP per controllare la differenziazione dei tenociti, il rimodellamento della matrice e la maturazione dei tessuti durante lo sviluppo e la riparazione. Un’alterata attività di Scx è associata a una compromissione dell’omeostasi tendinea, a una formazione difettosa dell’entesi e a processi di rimodellamento fibrotico rilevanti per la degenerazione muscoloscheletrica e per un’architettura anomala del tessuto connettivo. In quanto regolatore trascrizionale dell’organizzazione della ECM, la scleraxis è ampiamente studiata in modelli di lesione tendinea, fibrosi e specificazione del destino delle cellule stromali.

Le particelle di attivazione lentivirale Scleraxis (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Scx in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Scleraxis (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Scx, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Scleraxis. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Scx e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.