Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAMD8: sc-416890-ACT

SAMD8 (sterile alpha motif domain containing 8) est une protéine membranaire associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans le métabolisme des sphingolipides, en particulier dans la régulation de l’interconversion entre céramide et sphingomyéline au sein de l’homéostasie des lipides membranaires. Grâce à son rôle présumé dans le contrôle des pools de sphingolipides bioactifs, SAMD8 peut influencer la fonction du RE, la composition membranaire et les processus de signalisation en aval liés aux réponses au stress et aux décisions de destinée cellulaire. Un déséquilibre des sphingolipides est une caractéristique récurrente de la biologie des maladies métaboliques, inflammatoires et neurodégénératives, ainsi que de phénotypes associés au cancer, ce qui fait de SAMD8 un nœud utile pour des études mécanistiques des voies. Moduler l’expression de SAMD8 permet d’examiner comment le remodelage lipidique du RE s’articule avec la signalisation cellulaire et l’homéostasie des organites dans des systèmes cellulaires humains.

SAMD8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SAMD8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAMD8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SAMD8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SAMD8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAMD8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SAMD8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAMD8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAMD8 dans les cellules tumorales présentant une expression de SAMD8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.