RPGRIP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-412755-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RPGRIP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RPGRIP1 Double Nickase Plasmid (h) e il RPGRIP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RPGRIP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RPGRIP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RPGRIP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RPGRIP1 (retinitis pigmentosa GTPase regulator–interacting protein 1) codifica una proteina della zona di transizione ciliare che funge da impalcatura per RPGR e per altri componenti necessari a garantire l’integrità del cilio connettore dei fotorecettori e il traffico proteico verso il segmento esterno. Contribuisce all’organizzazione del centrosoma/corpo basale e sostiene l’assemblaggio e il mantenimento del cilio primario, collegando la dinamica del citoscheletro alla funzione del “cancello” ciliare. I processi dipendenti da RPGRIP1 intersecano le vie di segnalazione mediate dalle ciglia regolando la compartimentalizzazione dei recettori e dei macchinari di trasporto. L’alterazione genetica di RPGRIP1 è associata a degenerazioni retiniche ereditarie, tra cui l’amaurosi congenita di Leber e la retinite pigmentosa, rendendolo un bersaglio chiave per modellare la disfunzione ciliare nelle cellule umane.
RPGRIP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RPGRIP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RPGRIP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RPGRIP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RPGRIP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.