RNF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422689

概要

Rnf4はRNF4をコードしており、RNF4はRING型のSUMO標的ユビキチンリガーゼ（STUbL）である。RNF4はポリSUMO化されたタンパク質を認識し、それらのユビキチン化を触媒して、分解（ターンオーバー）またはタンパク質複合体のリモデリングへと導く。マウス細胞では、RNF4はSUMO修飾された修復因子やシグナル因子の除去を促進することでDNA損傷応答の制御を助け、SUMO化とユビキチン依存的プロテオスタシスを結び付けている。この活性は、核内タンパク質アセンブリを動的に調節することを通じて、ゲノム安定性、複製ストレスへの対処、転写制御に寄与する。STUbL介在経路の破綻は、タンパク質品質管理の障害やDNA修復不全に関連する細胞の形質転換や神経変性表現型と広く関係している。

RNF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRnf4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rnf4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rnf4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RNF4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RNF4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rnf4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RNF4の機能に不可欠なRnf4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rnf4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RNF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRNF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rnf4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RNF4 HDRプラスミド（m）および RNF4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRnf4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRnf4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。