RNF4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422689

Descripción general

Rnf4 codifica RNF4, una ligasa de ubiquitina (STUbL) de tipo RING dirigida a SUMO, que reconoce proteínas poliSUMOiladas y cataliza su ubiquitinación para dirigir su recambio o la remodelación de complejos proteicos. En células de ratón, RNF4 ayuda a regular las respuestas al daño del ADN promoviendo la eliminación de factores de reparación y señalización modificados por SUMO, conectando la SUMOilación con la proteostasis dependiente de ubiquitina. Esta actividad contribuye a la estabilidad del genoma, al manejo del estrés replicativo y al control transcripcional mediante la regulación dinámica de ensamblajes proteicos nucleares. La desregulación de las vías mediadas por STUbL es ampliamente relevante para la transformación celular y para fenotipos neurodegenerativos asociados con un control de calidad proteica deteriorado y una reparación del ADN defectuosa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RNF4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rnf4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rnf4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rnf4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RNF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rnf4 para la investigación de la señalización de RNF4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rnf4 críticos para la función de RNF4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rnf4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RNF4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RNF4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rnf4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RNF4 (m) y el plásmido HDR RNF4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rnf4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rnf4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.