RNF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422689

Panoramica

Rnf4 codifica RNF4, una ligasi ubiquitina di tipo RING mirata a SUMO (STUbL) che riconosce proteine poli-SUMOilate e ne catalizza l’ubiquitinazione, indirizzandole alla degradazione oppure favorendo il rimodellamento dei complessi proteici. Nelle cellule di topo, RNF4 contribuisce a regolare le risposte al danno al DNA promuovendo la rimozione di fattori di riparazione e di segnalazione modificati da SUMO, collegando la SUMOilazione alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina. Questa attività contribuisce alla stabilità del genoma, alla gestione dello stress replicativo e al controllo trascrizionale attraverso la regolazione dinamica degli assemblaggi proteici nucleari. La disregolazione delle vie mediate dalle STUbL è ampiamente rilevante per la trasformazione cellulare e per fenotipi neurodegenerativi associati a un controllo di qualità proteica compromesso e a difetti nella riparazione del DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rnf4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rnf4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rnf4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RNF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rnf4 per lo studio della segnalazione di RNF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rnf4 critici per la funzione di RNF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rnf4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RNF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RNF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rnf4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RNF4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RNF4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rnf4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rnf4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.