RNase H1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422686

Panoramica

Rnaseh1 nel topo codifica per RNase H1, un’endonucleasi struttura-specifica che degrada il filamento di RNA negli ibridi RNA:DNA e risolve gli R-loop generati durante replicazione e trascrizione. Processando gli intermedi dei frammenti di Okazaki e limitando la formazione persistente di R-loop, RNase H1 sostiene la stabilità del genoma mitocondriale e nucleare, la progressione della forcella replicativa e l’omeostasi trascrizionale. Un metabolismo deregolato degli ibridi RNA:DNA è associato a stress replicativo, attivazione dei segnali di danno al DNA e disfunzione mitocondriale, rendendo Rnaseh1 un nodo utile per studiare le vie di mantenimento del genoma. La perturbazione di Rnaseh1 è quindi rilevante per studi meccanicistici sul metabolismo degli acidi nucleici, sulla biologia mitocondriale e sui fenotipi di risposta allo stress nelle cellule di mammifero.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase H1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rnaseh1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rnaseh1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rnaseh1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RNase H1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rnaseh1 per lo studio della segnalazione di RNase H1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rnaseh1 critici per la funzione di RNase H1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rnaseh1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RNase H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RNase H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rnaseh1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RNase H1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RNase H1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rnaseh1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rnaseh1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.