Rlf Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410980

Panoramica

RLF (RLF zinc finger) codifica Rlf, una proteina nucleare legante il DNA implicata nella regolazione della trascrizione attraverso l’interazione con la cromatina e con elementi regolatori del DNA. Rlf contiene motivi a dita di zinco compatibili con ruoli nel controllo di programmi di espressione genica che influenzano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e il mantenimento dell’identità cellulare. Un’alterata regolazione delle reti trascrizionali che coinvolgono RLF è stata associata a un controllo proliferativo compromesso e ad altre anomalie dell’espressione genica rilevanti per la biologia delle malattie, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rlf (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RLF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RLF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RLF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rlf.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RLF per lo studio della segnalazione di Rlf, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RLF critici per la funzione di Rlf
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RLF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rlf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rlf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RLF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rlf Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rlf (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RLF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RLF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.