Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RKIP Plasmide Double Nickase (m): sc-423929-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RKIP Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RKIP Double Nickase Plasmid (m) e il RKIP Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pebp1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RKIP Antibody (8): sc-101504
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RKIP Plasmide Double Nickase (m) | sc-423929-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RKIP Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423929-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Pebp1** codifica la **Raf kinase inhibitory protein (RKIP)**, un modulatore conservato della segnalazione mediata da chinasi che frena la cascata **RAF–MEK–ERK** e ne modella ampiezza e durata. RKIP interagisce inoltre con la segnalazione dei **GPCR** attraverso la regolazione di **GRK2** e può influenzare le risposte infiammatorie associate a **NF-κB**, collegandosi così a un controllo più ampio di proliferazione e differenziamento cellulare, nonché della segnalazione da stress. Alterazioni dell’abbondanza o dell’attività di RKIP sono state associate a fenotipi rilevanti per la segnalazione oncogenica, la plasticità epitelio–mesenchimale e processi infiammatori o neurodegenerativi, rendendo **Pebp1** un nodo utile per studi meccanicistici a livello di via in modelli murini.
RKIP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pebp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pebp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pebp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pebp1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.