RIF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-408916-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RIF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RIF1 Double Nickase Plasmid (h) e il RIF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LRIF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RIF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La RIF1 umana (replication timing regulatory factor 1) è una proteina associata alla cromatina che coordina la scelta della via di riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e la regolazione delle origini di replicazione. Agisce a valle della segnalazione del danno promuovendo il non-homologous end joining (NHEJ) antagonizzando la resezione delle estremità del DNA e contribuisce alla tempistica di replicazione e alla stabilità delle forcelle durante la fase S. Attraverso queste funzioni, RIF1 influenza l’integrità del genoma, i processi associati ai telomeri e le risposte cellulari allo stress replicativo. La disregolazione delle vie legate a RIF1 è spesso studiata in contesti di instabilità cromosomica e di capacità di riparazione del DNA alterata, osservate in molteplici modelli rilevanti per la malattia.
RIF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LRIF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LRIF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LRIF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LRIF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.