REM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422645

概要

マウスRem1は、電位依存性Ca2+チャネルの輸送（トラフィッキング）やゲーティングを制御することで膜興奮性を調節する、小型GTP結合タンパク質RGKファミリーの一員であるREMをコードしています。REMは、チャネルβサブユニットや細胞骨格制御因子との相互作用を介して、Ca2+依存性シグナル伝達、興奮―収縮連関、ならびに活動依存的な転写プログラムに影響を与えます。Rem1の発現は細胞刺激に応答して変化し、電気的に活動性の高い組織における細胞増殖や分化の制御との関連も示されています。このことから、心臓電気生理、神経シグナル伝達、血管平滑筋機能に関する研究で注目されています。RGKシグナルの異常は、Ca2+流入の変化が下流経路に影響する状況として、不整脈誘発機構、神経適応、リモデリング過程の文脈で検討されています。

REM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRem1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rem1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rem1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、REMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、REMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rem1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• REMの機能に不可欠なRem1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rem1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• REM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびREM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rem1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  REM HDRプラスミド（m）および REM HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRem1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRem1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。