REM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422645

Panoramica

Rem1 del topo codifica REM, un membro della famiglia RGK di piccole proteine leganti il GTP, che modula l’eccitabilità di membrana regolando il traffico e il gating dei canali del Ca2+ voltaggio-dipendenti. Attraverso interazioni con le subunità β dei canali e con regolatori del citoscheletro, REM influenza la segnalazione Ca2+-dipendente, l’accoppiamento eccitazione–contrazione e programmi trascrizionali dipendenti dall’attività. L’espressione di Rem1 risponde alla stimolazione cellulare ed è stata collegata al controllo della crescita e della differenziazione cellulare in tessuti elettricamente attivi, supportando la ricerca in elettrofisiologia cardiaca, segnalazione neuronale e funzione della muscolatura liscia vascolare. La deregolazione della segnalazione RGK è studiata nel contesto di meccanismi aritmogenici, neuroadattamento e processi di rimodellamento, in cui un flusso di Ca2+ alterato influisce sulle vie a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO REM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rem1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rem1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rem1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina REM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rem1 per lo studio della segnalazione di REM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rem1 critici per la funzione di REM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rem1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal REM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal REM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rem1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal REM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR REM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rem1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rem1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.