Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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RDH10 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430225-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RDH10 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- RDH10 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal RDH10 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal RDH10 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Rdh10. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RDH10 Antibody (F-6): sc-514121
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RDH10 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-430225-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
RDH10 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-430225-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino **Rdh10** codifica la retinolo deidrogenasi 10 (RDH10), una deidrogenasi/riduttasi a catena corta associata alla membrana che catalizza l’ossidazione dell’all-trans-retinolo in all-trans-retinale, un passaggio chiave limitante la velocità nella biosintesi dell’acido retinoico. Attraverso il controllo della disponibilità di acido retinoico, RDH10 modula programmi trascrizionali dipendenti dai recettori dell’AR che governano il patterning embrionale, l’organogenesi e la differenziazione cellulare. Un’alterazione dell’attività di RDH10 perturba l’omeostasi dei retinoidi e le reti di espressione genica a valle, collegando questo enzima ad anomalie dello sviluppo e a una morfogenesi tissutale disregolata. In quanto regolatore metabolico di snodo della segnalazione retinoide, RDH10 è spesso studiato in vie che integrano il metabolismo lipidico con la regolazione trascrizionale.
RDH10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Rdh10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
RDH10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Rdh10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Rdh10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RDH10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Rdh10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RDH10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RDH10 nelle cellule tumorali con espressione di Rdh10 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.