RBP-Jκ Plasmide Double Nickase (m): sc-422626-NIC

Rbpj codifica RBP-Jκ, un fattore di trascrizione che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che funge da principale effettore nucleare della segnalazione Notch canonica. Dopo l’attivazione del recettore Notch, RBP-Jκ passa da repressore trascrizionale ad attivatore grazie al reclutamento di NICD e di coattivatori, regolando geni che controllano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione. Nei sistemi murini, i programmi dipendenti da RBP-Jκ sono fondamentali per l’ematopoiesi, la neurogenesi e lo sviluppo delle cellule immunitarie, e la disregolazione degli output trascrizionali Notch–RBP-Jκ è spesso utilizzata come quadro meccanicistico per studiare la trasformazione oncogenica e i fenotipi dello sviluppo. In quanto nodo che integra gli input di Notch con la cromatina e il controllo trascrizionale, Rbpj è ampiamente studiato nei pathway che governano il mantenimento di cellule staminali/progenitrici e l’impegno di linea.

RBP-Jκ Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rbpj nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rbpj. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rbpj. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rbpj interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.