Ras-GRF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422605

Panoramica

Rasgrf1 codifica Ras-GRF1, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina regolato da calcio/calmodulina che attiva le GTPasi della famiglia Ras e collega l’attività neuronale alla segnalazione MAPK/ERK a valle. Nel topo, Ras-GRF1 contribuisce alla plasticità sinaptica, all’apprendimento e alla memoria e all’espressione genica dipendente dall’attività attraverso la modulazione di vie legate a Ras e Rap, con ruoli aggiuntivi nella segnalazione associata a insulina/IGF e nel controllo della crescita in specifici tessuti. Tramite questi nodi di segnalazione, Ras-GRF1 influenza la proliferazione cellulare, la differenziazione e la dinamica del citoscheletro, risultando quindi rilevante per studi su fenotipi neurosviluppativi e sulla biologia deregolata della via di Ras. Alterazioni della funzione di Ras-GRF1 sono state investigate in contesti di segnalazione neuronale aberrante e di rimodellamento di vie oncogeniche, a supporto del suo impiego come punto di accesso meccanicistico per la dissezione delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rasgrf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rasgrf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rasgrf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ras-GRF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rasgrf1 per lo studio della segnalazione di Ras-GRF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rasgrf1 critici per la funzione di Ras-GRF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rasgrf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rasgrf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ras-GRF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ras-GRF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rasgrf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rasgrf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.