RARα/Retinoic Acid Receptor α Plasmide Double Nickase (h): sc-400529-NIC

RARA codifica RARα, un recettore nucleare attivato dal ligando che forma un eterodimero con RXR per legarsi agli elementi di risposta all’acido retinoico e regolare programmi trascrizionali che controllano le decisioni sul destino cellulare. Attraverso la segnalazione dei retinoidi, RARα coordina in modo dipendente dal contesto processi quali lo sviluppo embrionale, la differenziazione epiteliale, il controllo del ciclo cellulare e il rimodellamento della cromatina. L’attività di RARα è modulata dalla disponibilità del ligando e dallo scambio di coregolatori, collegandolo a vie che governano la repressione/attivazione trascrizionale e l’impegno di linea. La disregolazione della trascrizione dipendente da RARA e della segnalazione del recettore è stata associata ad alterati stati di differenziazione e a programmi trascrizionali oncogenici in contesti ematopoietici e di tessuti solidi, a supporto della sua rilevanza negli studi sui meccanismi di malattia.

RARα/Retinoic Acid Receptor α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RARA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RARA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RARA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RARA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.