Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Ran Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422594
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ran Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Ran, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ran Antibody (A-7): sc-271376
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ran Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422594 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ran (proteina nucleare correlata a Ras) è una piccola GTPasi conservata che stabilisce un gradiente RanGTP/RanGDP attraverso l’involucro nucleare per guidare il trasporto nucleocitoplasmatico direzionale tramite le vie delle importine/esportine. Oltre all’importazione e all’esportazione nucleare, Ran regola l’assemblaggio del fuso mitotico, la funzione del centrosoma e la riformazione dell’involucro nucleare, collegando le dinamiche del trasporto alla progressione del ciclo cellulare. Attraverso questi ruoli, Ran influenza la regolazione trascrizionale, la stabilità del genoma e le risposte allo stress, che sono spesso alterate in disturbi proliferativi e del neurosviluppo e in fenotipi cellulari associati al cancro. Nei sistemi murini, Ran è ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi fondamentali della mitosi e del trasporto nucleare che modellano la differenziazione e l’omeostasi tissutale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ran (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ran in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ran insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ran a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ran.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ran per lo studio della segnalazione di Ran, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ran critici per la funzione di Ran
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ran per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Ran CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ran CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ran. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Ran Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ran (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ran per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ran definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.